基于“病證結合”理論探討廣泛性焦慮心陰
虧虛證大鼠模型的構建與評價

摘要：目的：基于“病證結合”理論，構建和評價廣泛性焦慮（generalized anxiety disorder, GAD)心陰虧虛證 大鼠模型。方法:按隨機數字表法將32只SD大鼠隨機分為4組，每組8只，即空白組、模型組、天王補心丸組、di西泮片組。根據先疾病后證型的思路進行造模，除空白組外，其余3組大鼠通過不確定性空瓶應激法先建立 GAD模型，再采用水環境小站臺睡眠剝奪法形成大鼠心陰虧虛證候模型，以此構建GAD心陰虧虛證模型。造模 成功后，空白組和模型組不給與任何處理，天王補心丸組、di西泮片組分別給予天王補心丸、di西泮片灌胃，1次/ d,連續干預21 d。從宏觀表征、微觀指標、以方驗證三個方面對模型進行評價。每日觀察大鼠一般情況。造模 前、造模后及干預第1、2、3周末采用高架十字迷宮實驗、曠場實驗觀察大鼠行為學變化。造模前、造模后及干預 第3周末檢測大鼠收縮壓、心率、呼吸、肛溫水平。干預第3周末采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應法（real - time PCR)檢測大鼠海馬GR mRNA表達水平。結果：（1)宏觀表征：①行為學結果顯示：與空白組比較，造模后、 造模后1周、造模后2周、造模后3周模型組OE%值、OT%值、水平運動、垂直運動均降低（P <0. 05)。②生命體 征結果顯示：與空白組比較，造模后、造模后3周模型組收縮壓均較低（P<0. 01);心率、呼吸、肛溫均較高（P< 0.01)。（2)微觀指標:RT-PCR結果顯示：造模后3周，與空白組比較，模型組大鼠海馬GR mRNA表達水平降 低（P <0. 01)。（3)以方驗證：①行為學結果：與模型組比較，天王補心丸組、di西泮片組干預后各時間點OE%值、OT%值、水平運動、垂直運動均升高（P<0. 05);di西泮片組干預后各時間點OE%值、干預第1、周末OT%值、水平運動和干預第1、周末垂直運動均升高（P <0. 01)。②生命體征結果：干預第3周末，與模型組比較，天 王補心丸組、di西泮片組收縮壓均升高（P <0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低（P <0. 05)。③RT - PCR結果：干預 第3周末，與模型組比較，天王補心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高（P <0. 05)。結論：采 用不確定性空瓶應激法結合水環境小站臺睡眠剝奪法成功構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型，該模型較為穩 定，可控性相對較強，值得進一步應用。

關鍵詞：廣泛性焦慮;心陰虧虛;病證結合;模型

廣泛性焦慮癥（GAD)是常見的焦慮癥類型，以泛化 或持續存在的焦慮為主要臨床表現，常伴有自主神經功能 紊亂及運動不安的癥狀¹。中醫學認為心脾兩虛、肝郁化 火和心腎不交是GAD的主要證型²。隨著現代生活節奏 的加快，工作生活壓力的加大，GAD證型逐步由肝郁化火 向心陰虧虛轉變³。近年來，眾多學者^4-6聚焦于中醫藥 治療GAD的多靶點整體作用優勢，相繼報道了中藥、針灸、 推拿等對GAD的治療效果。但是，關于中醫藥治療GAD 的具體作用機制仍不清楚⁷。中醫診療講究對疾病進行 辨證論治，但目前關于GAD的病證結合動物模型還不夠成 熟，由于缺乏機制研究的載體，所以影響了 GAD的中醫應 用基礎研究進一步開展⁸。因此，建立穩定的、可重復的、 符合中醫病因bin機的GAD病證結合動物模型十分必要。 病證結合既是一種理論，也是一種方法，體現了現代中醫 “據病言證，究證言法，法隨證立，方證相應”的診療思 路⁹。病證結合動物模型^[10 ,是基于中醫藥理論指導，結 合現代醫學理論與實驗動物科學知識，采用中醫學病因復 制證候動物模型，通過現代醫學病因復制疾病動物模型，令 模型同時具有疾病與證候特征的一類造模方法。本研究根 據病證結合理論，采用不確定性空瓶應激法^[11]建立GAD 疾病模型，結合水環境小站臺睡眠剝奪法^[12造成心陰虧虛 證候模型，終構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型，并從 宏觀表征、微觀指標、以方驗證（天王補心丸）三個角度評 價了該模型

結果顯示：①行為學：與模型組比較，天王補心丸組、di西泮片組干預后各時間點OE%值、OT%值、水平運動、垂 直運動均升高（P< 〇.〇5);di西泮片組干預后各時間點 OE%值、干預第1、周末OT%值、各時間點水平運動和干 預第1、周末垂直運動均升高（P<0. 01)。②生命體征： 干預第3周末，與模型組比較，天王補心丸組、di西泮片組 收縮壓均升高（P < 0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低（P < 0. 05)。③RT - PCR:干預第3周末，與模型組比較，天王補 心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高 (P <0.05)。結果說明天王補心丸明顯改善了模型中GAD 心陰虧虛大鼠的焦慮癥狀及心陰虧虛狀況。中醫學有‘‘方 證相應”之說，方證相應強調了方劑與其作用對象之間的 相互作用，即方劑的功用是特定方藥與其作用對象特定證 之間相互作用的結果²⁶ ,故通過‘‘以方驗證”的方式可以 反證證候模型是否構建成功。天王補心丸為中醫經典名 方，具有滋陰養血、補心安神等功效，主要用于心陰不足，心 悸健忘，失眠多夢等癥,是治療GAD心陰虧虛證的代表性 方藥^27-28。已有臨床研究²⁹證實，采用天王補心湯治療 心陰不足型GAD可以達到和西藥同樣的抗焦慮效果。本 研究結果表明天王補心丸對GAD心陰虧虛大鼠的焦慮行 為及心陰虧虛表現均有明顯改善作用。故從‘‘方證相關， 以方驗證”的評價角度證實了本實驗模型的穩定性和可靠 性。同時，本研究結果也說明了天王補心丸在干預治療 GAD心陰虧虛大鼠時，主要通過增加大鼠海馬組織內GR mRNA表達量以發揮抗焦慮作用。由此可知，病證方藥緊 密聯系，病證結合、方證相應，天王補心丸切實地對GAD心 陰虧虛大鼠病證結合模型進行了驗證和評價。

5結論

本研究采用不確定性空瓶應激法結合水環境小站臺睡 眠剝奪法構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型，并且從宏觀 表征、微觀指標、以方驗證（天王補心丸)3個角度對模型進 行了評價。結果表明，模型穩定、相對可控、造模理念符合 中醫病因bin機，值得推廣應用。受實驗條件限制，本模型的 微觀指標相對較少，有待進一步研究。